易错PCR是什么?关于易错PCR的详细介绍

创闻科学2020-11-17 13:24:40

易错PCR(error-prone PCR)是指通过改变PCR反应条件在PCR扩增的过程中提高突变率的一种方法。易错PCR使得错误碱基随机地以一定的频率掺入到扩增的序列中,从而得到随机突变的DNA群体。易错PCR是定向进化建库的一种常用手段。

反应条件

易错PCR通常采取以下几个反应条件:

  1. 提高镁离子浓度。

  2. 加入锰离子。

  3. 改变体系中四种的dNTPs浓度比例。

  4. 使用低保真度DNA聚合酶如Taq DNA聚合酶,并适当提高反应浓度。

  5. 增加延伸时间。

  6. 增加反应循环数。

易错PCR通过改变扩增过程中的突变频率, 从而引入随机突变,其突变率大约为每个碱基0.66%。如果使用连续稀释的扩增方法可以将突变率提高到约每个碱基3.5%。

应用范围

易错PCR涉及的遗传变化只发生在单一分子内部,适用于单一酶类的定向进化。它虽然可以有效的产生突变,且操作方法简单,但理想的碱基置换率和易错的最佳条件主要依赖于突变的DNA片段的长度和GC含量。